Для запобігання перехресного забруднення під час експлуатації основними вимогами щодо його проектування, будівництва та управління експлуатацією є:
1. Проектування та побудова лабораторії, безпечна робоча система або стандартні експлуатаційні процедури повинні відповідати вимогам діючої групи "Загальні вимоги до лабораторної біобезпеки"; GB19489.
2. ПЛР поділяється на чотири функціональні області відповідно до робочих етапів, а саме: область зберігання та підготовки реагенту, зона підготовки зразка, зона ампліфікації та область аналізу продукту ампліфікації. Якщо обладнаний флуоресцентний інструмент ПЛР у реальному часі, області ампліфікації та аналізу продукту можуть бути об'єднані. Кожна функціональна зона повинна бути чітко позначена, а обладнання та вироби в різних функціональних областях не повинні змішуватися.
Напрямок повітряного потоку лабораторії ПЛР можна здійснювати відповідно до зони зберігання та підготовки реагенту → зона підготовки зразка → зона ампліфікації → зона розширеного аналізу продукту, щоб запобігти потраплянню ампліфікованих продуктів у попередньо посилену область разом із потоком повітря. Це може бути здійснено способом зниження тиску повітря із зони зберігання та підготовки реагенту → зона підготовки зразка → зона ампліфікації → зона аналізу продукту ампліфікації. Цього можна досягти, встановивши витяжні вентилятори, витяжні пристрої негативного тиску або інші можливі методи.
3. Входячи в кожну робочу зону, слід суворо слідувати одному напрямку, тобто зоні зберігання та підготовки реагенту → зона підготовки зразка → зона ампліфікації → область аналізу продукту ампліфікації. Слід використовувати різні робочі зони (наприклад, різні кольори). Працівники не повинні знімати робочий одяг, коли вони залишають кожну робочу зону.
4. Очищення лабораторії повинно проводитись у напрямку зберігання та підготовки реагенту → зона підготовки зразка → зона ампліфікації → зона розширеного аналізу продукту. У різних експериментальних районах повинні бути власні пристрої для очищення для запобігання перехресного забруднення.
5. Після закінчення робіт робочу зону необхідно негайно прибрати. Поверхня лабораторної лавки в робочій зоні повинна витримувати дезінфекційну та очисну дію хімічних речовин, таких як гіпохлорит натрію. Ультрафіолетове опромінення на поверхні лабораторної лавки повинно бути зручним та ефективним. Оскільки відстань та енергія ультрафіолетового опромінення дуже важливі для ефекту знезараження, може використовуватися рухома ультрафіолетова лампа (довжина хвилі 254 нм), а після завершення роботи її можна налаштувати на опромінення протягом 60-90 см на експериментальному столі . Оскільки ампліфікований продукт становить лише кілька сотень або десятків пар основ (bp), він не чутливий до ультрафіолетових пошкоджень, тому ультрафіолетовий посилений фрагмент повинен опромінюватися довший час, переважно протягом ночі.
Функціями зони зберігання та підготовки реагентів є: підготовка реагентів для зберігання, дозування реагентів та підготовка реакційної суміші для посилення, а також зберігання та підготовка витратних матеріалів, таких як пробірки та наконечники для центрифуги. Матеріали, такі як реагенти для зберігання та витратні матеріали, що використовуються для підготовки зразків, повинні безпосередньо транспортуватися до зони зберігання та підготовки реагентів і не можуть проходити через зону виявлення посилення. Позитивні контрольні матеріали та матеріали контролю якості в комплекті не повинні зберігатися в цій зоні, а повинні зберігатися в цій зоні. Область обробки зразків.
Функцією зони підготовки зразка є: вилучення, зберігання та додавання в реакційну трубку ампліфікації нуклеїнової кислоти (РНК, ДНК). Для операцій, що включають клінічні зразки, повинні бути дотримані вимоги до засобів захисту, засобів індивідуального захисту та експлуатаційних специфікацій для вторинних лабораторій біобезпеки. Оскільки забруднення аерозолями може відбуватися під час змішування зразків та очищення нуклеїнової кислоти, в цій області можуть бути встановлені умови позитивного тиску, щоб уникнути забруднення аерозолем із сусідніх районів. Щоб уникнути перехресного забруднення між зразками, після додавання досліджуваної нуклеїнової кислоти необхідно накрити реакційну пробірку, що містить реакційну суміш. Для потенційно інфекційних матеріалів кришку необхідно відкрити в шафі біологічної безпеки, а також повинні бути чіткі процедури поводження з пробами та інактивації.
Функцією зони ампліфікації є: синтез ДНК, ампліфікація та виявлення ДНК. Щоб уникнути забруднення, спричиненого аерозолями, ходьба по цій території повинна бути зведена до мінімуму. Слід зазначити, що всі випробувані реакційні пробірки не повинні відкриватися в цій області.
Функцією області аналізу ампліфікованого продукту є: подальший аналіз та визначення ампліфікованих фрагментів, таких як гібридизація, електрофорез для засвоєння ферментів, денатурація високоефективного аналізу рідини, секвенування тощо. Продукти ампліфікації нуклеїнової кислоти мають різні методи аналізу, такі як методи гібридизації зонду. на мембранах або на мікропланшетах чи мікросхемах (радіонуклідне маркування чи нерадіоактивне нуклідне маркування), прямий або перетравлений агарозний гелевий електрофорез, електрофорез гелю поліакриламідного гелю, перенесення Півдня, методи секвенування нуклеїнових кислот, мас-спектрометрія тощо.
Зона аналізу продуктів ампліфікації є основним джерелом забруднення продукту ампліфікації в лабораторії ПЛР, тому слід бути обережним, щоб уникнути винесення продукту ампліфікації через вироби та робочий одяг у цій галузі. Під час використання методу PCR-ELISA для виявлення ампліфікованих продуктів необхідно промити пластини для миття плит, а відхідну рідину потрібно збирати в 1 моль / л HCl і не можна виливати в лабораторії, а слід викинути. з лабораторії ПЛР. Крапля. Використовуваний наконечник також потрібно замочити в 1 моль / л HCl і потім помістити в мішок для сміття для утилізації згідно з процедурами, такими як спалювання. Оскільки в цій зоні можуть використовуватися певні генетичні мутації та токсичні речовини, такі як бромід етидію, акриламід, формальдегід або радіонукліди тощо, слід звернути увагу на безпеку експериментаторів.